灰指甲的直接鏡檢法是通過(guò)顯微鏡觀察病甲樣本中真菌結(jié)構(gòu)來(lái)確診甲癬的常用方法。主要有取樣處理、氫氧化鉀溶解、顯微鏡觀察、結(jié)果判讀、鑒別診斷五個(gè)步驟。
1、取樣處理
使用消毒刀片刮取病甲遠(yuǎn)端或側(cè)緣的甲屑，選取顏色異常、質(zhì)地松脆的甲下碎屑。取樣需深入甲板與甲床交界處，避免僅采集表層角質(zhì)。樣本置于載玻片后標(biāo)記患者信息，避免交叉污染。取樣時(shí)可能伴隨輕微疼痛，但無(wú)須特殊處理。
2、氫氧化鉀溶解
將10%-20%氫氧化鉀溶液滴加于甲屑樣本，覆蓋蓋玻片后靜置5-10分鐘。氫氧化鉀可溶解角蛋白使真菌菌絲或孢子顯影更清晰。冬季需37℃溫育加速溶解。溶解不充分會(huì)導(dǎo)致假陰性，過(guò)度溶解可能破壞真菌形態(tài)。
3、顯微鏡觀察
使用10倍物鏡初步定位，40倍物鏡確認(rèn)真菌結(jié)構(gòu)。皮膚癬菌可見(jiàn)分隔菌絲和鏈狀關(guān)節(jié)孢子，念珠菌可見(jiàn)假菌絲和芽生孢子。需調(diào)整焦距觀察不同層面，注意與甲板纖維等雜質(zhì)鑒別。每樣本至少觀察5個(gè)視野以提高檢出率。
4、結(jié)果判讀
發(fā)現(xiàn)透明分隔菌絲或成串孢子可判定陽(yáng)性。菌絲直徑3-5微米，孢子呈圓形或卵圓形。陰性結(jié)果需結(jié)合臨床表現(xiàn)，必要時(shí)重復(fù)檢測(cè)或進(jìn)行真菌培養(yǎng)。混合感染時(shí)可能出現(xiàn)不同形態(tài)真菌共存。
5、鑒別診斷
需排除銀屑病甲、扁平苔蘚甲等非真菌性甲病。銀屑病甲可見(jiàn)甲板內(nèi)中性粒細(xì)胞聚集，扁平苔蘚甲可見(jiàn)甲母質(zhì)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。直接鏡檢聯(lián)合真菌培養(yǎng)可將診斷準(zhǔn)確率提升至80%以上。
直接鏡檢前3天應(yīng)停用抗真菌藥物，避免假陰性。取樣后保持甲部干燥，防止繼發(fā)感染。若鏡檢結(jié)果與臨床癥狀不符，建議進(jìn)行真菌培養(yǎng)或分子生物學(xué)檢測(cè)。日常需注意避免與他人共用指甲剪，穿透氣鞋襪減少真菌滋生環(huán)境。
溫馨提示：醫(yī)療科普知識(shí)僅供參考，不作診斷依據(jù)；無(wú)行醫(yī)資格切勿自行操作，若有不適請(qǐng)到醫(yī)院就診
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